維修排除illumina DNA 測序儀問題：
      自動 DNA 測序是分子生物學實驗室中最常見且通常最強大的技術之一。不幸的是，它并不總是有效，當它無效時，很難找出哪里出了問題。幸運的是，大多數失敗（或次優）的 DNA 測序結果只有有限的幾個原因。為了幫助排除illumina DNA 測序問題，我們創建了一系列指南來確定最常見的原因。這些指南還包括有關如何克服每種問題類型的提示，以及提高 DNA 測序質量的更一般提示。如果您對這些指南有任何意見或問題，請電話聯系我們的支持團隊，我們很樂意聽取您的建議。

 

      我的illumina DNA測序儀測序數據中的信號強度很低。什么可能導致這種情況？
      低信號強度可能由許多因素引起，包括熱循環儀故障（在整個板故障的情況下）、清理不良和測序模板數量/質量不足。使用測序試劑盒中提供的 pGEM 對照和 -21 M13 引物來隔離模板質量/質量問題或測序反應失敗。如果 DNA 質量、PCR 純化和測序反應純化步驟正確執行，在測序反應中增加模板和引物可以改善信號。有關測序反應中使用的模板 DNA 量，請查看此信息。 檢查模板的質量。如果需要，準備新鮮的 DNA 并重復反應。您可以訪問我們的質粒 DNA 純化支持中心頁面以獲取有關純化的提示。
      一般來說，我們建議您：
      1、確保在illumina測序工作流程中使用新鮮、未過期的試劑。
      2、檢查熱循環儀，將升溫速率設置為 1 攝氏度/秒，使用正確的熱循環參數并檢查熱循環儀校準。 
      3、準備新的底漆工作庫存或訂購新底漆。在最終反應中使用 3.2 pmol。
      4、如果在illumina測序反應中使用的 BigDye™ Terminator Ready Reaction Mix 少于推薦量，請在 20 µL 最終反應體積中使用 8 µL 的推薦量，或在 10 µL 最終反應體積中使用 4 µL。 
      5、如果存在染料斑點，請查看毛細管電泳 DNA 測序指南或與凈化套件制造商聯系，以獲取更多故障排除建議以去除染料斑點。

 

      如何確定illumina DNA 測序失敗的原因
      確定illumina DNA 測序結果不佳的原因通常非常困難，因為特定的測序問題可能有許多不同的原因，或者是多種相互作用因素的結果。通常，找出特定問題真正原因的唯一方法是執行消除過程。通過目視檢查測序軌跡的原始數據色譜圖和處理后的數據色譜圖，可以大大簡化此過程。在以下指南中，我們提供了有關最常見的測序問題的詳細信息，以及對其最可能原因的建議。原因按從最常見到最不常見的順序列出。我們還提供了有關如何克服每種測序問題類型的解決方案（如果已知）。手動檢查的替代方法（如果您運行的跟蹤次數過多，這將變得非常勞動密集型）是使用自動跟蹤分析系統，例如我們的QualTrace III DNA 測序 QC 軟件。QualTrace III將針對許多不同的測序問題自動掃描跡線，并且由于它通過分析原始數據來工作，因此它可以與任何堿基識別器一起使用。